測定樣品中各種游離氨基酸含量,可以除去脂肪雜質后,直接上柱進行分析。
測定蛋白質的氨基酸組成時樣品必須經(jīng)酸水解,使蛋白質完全變成氨基酸后才上柱進行分析。 經(jīng)過處理后的樣品上柱進行分析。上柱的樣品量根據(jù)所用自動分析儀的靈敏度來確定。一般為每種氨基酸0.1μmol 左右(水解樣品干重為0.3mg 左右)。測定必須在pH5~5.5、100℃下進行,反應進行時間為10~15min,生成的紫色物質在570nm 波長下進行比色測定。而生成的黃色化合物在440nm 波長下進行比色測定。做一個氨基酸全分析一般只需1h 左右,同時可將幾十個樣品一起裝入儀器,自動按序分析,最后自動計算給出精確的數(shù)據(jù)。儀器精確度在±1~3%。用陽離子交換柱分離及測定氨基酸所得